经体液病原DNA提取试剂盒分离的DNA适用于多种下游应用,包括PCR、Real-Time PCR、mNGS文库构建等,为科研及体外诊断提供**。
体液病原DNA提取试剂盒适用于从新鲜或冷冻的血浆、血清和无细胞体液中提取高质量的DNA。*使用氯仿等抽提,特有的缓冲液/蛋白酶K体系能迅速裂解病毒,使病毒蛋白与DNA分离,在蛋白酶K的作用下降解病毒蛋白,在高盐状态下将DNA选择性吸附于硅基质膜上,再通过快速的漂洗、离心步骤,去除蛋白等杂质,然后低盐的洗脱缓冲液将高纯度的DNA从吸附柱膜上洗脱下来。
DNA的分子生物学技术可以用于病源检测、遗传疾病检测、检测、系统进化、物种起源等常用的手段。目前的各种核酸分子生物学技术,包括荧光定量pcr、数字pcr、下一代测序等都获得了大量的进展。但是,这些技术检测结果良好都是以核酸纯化回收效率为前提的。好的DNA纯化技术,应当具备简便、安全、廉价的特点,且回收到的核酸应达到足够的浓度和纯度。
体液病原DNA提取试剂盒的注意事项:
1、血清或血浆避免反复冻融,否则会使蛋白变性或产生沉淀,导致提取的DNA的片段小,提取量下降。
2、如缓冲液Buffer GB、Buffer GD结晶或产生沉淀,可在56"C 水浴溶解。
3、所有离心步骤均为室温下操作。
体液病原DNA提取试剂盒的操作步骤:
1、200μl血清等体液(需回复到室温,不足可用0.9%NaCl或者PBS补足)转入上述1.5ml离心管,加入400μl裂解液DLB,立刻涡旋振荡充分混匀。
2、室温(15-25℃)放置10分钟,每隔5分钟,振荡混匀一次。
3、加入450μl无水乙醇,立刻涡旋振荡充分混匀。如果周围环境**25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入。
4、将上述混合物加入一个吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中)13000rpm离心30-60秒,倒掉收集管中的废液。如果总体积**过750μl,可分两次将溶液加入同一个吸附柱AC中。
5、加500μl去蛋白液RE,12000rpm离心30秒,弃废液。
6、加入500μl漂洗液WB,12000rpm离心30秒,弃废液,加入500μl漂洗液WB,重复一遍。
7、将吸附柱AC放回空收集管中,13000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
8、取出吸附柱AC,放入一个新的离心管中,在吸附膜的中间部位加30-50μl洗脱缓冲液EB(事先在65-70℃水浴中加热效果更好),室温放置1分钟,12,000rpm离心1分钟。如果想得到较多量的DNA,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,12,000rpm离心1分钟。洗脱体积越大,洗脱效率越高。如果需要的DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是至小体积不应少于20μl,体积过小降低洗脱效率,减少DNA产量。
9、DNA可以存放在2-8℃,如果要较长时间存放,可以放置在-20℃。
体液病原DNA提取试剂盒组成成分:
1、裂解液DLB;
2、去蛋白液RE;
3、漂洗液WB;
4、洗脱缓冲液EB;
5、吸附柱AC;
6、收集管。
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