福尔马林固定石蜡包埋技术(Formalin-Fixed and Parrffin-Embedded, FFPE)是一种组织保存技术。这种技术为了维持细胞核的蛋白结构,先用福尔马林固定然后将组织用固体石蜡包埋,以供切片后作组织学诊断或研究使用。
FFPE样本DNA提取试剂盒中常用的法脱蜡法的过程和问题:
目前应用在成熟试剂盒中的脱蜡方法主要是溶剂脱蜡法,其中脱蜡法由于其脱蜡彻底的特性,较广泛的应用在疾病研究中。
在脱蜡法中,需要将石蜡包埋组织浸泡在溶液中进行脱蜡,后面经过两次高温处理,每次各一个小时,分别在56℃和90℃。在此期间结合消化缓冲液和蛋白酶K来消化组织,同时利用梯度乙醇来疏松组织结构、促进消化液渗入并去除组织中痕量。
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FFPE样本DNA提取试剂盒提供了一种快速提纯方法,可在短短时间内从福尔马林固定的FFPE组织样品中分离和纯化总RNA。由于使用福尔马林固定组织导致RNA和蛋白质的交联,并且嵌入组织样品的过程也可导致RNA随时间的破碎。FFPE样本DNA提取试剂盒允许逆转部分福尔马林的修饰,从而获得高质量和高产量的RNA。该试剂盒能够净化所有大小的RNA,从大的mRNA和核糖体RNA到microRNA和小干扰RNA,取决于FFPE组织的年限,因为已知RNA的碎片化会随着时间的推移而发生。
储存条件:
磁珠悬浮液和蛋白酶K置于2-8℃保存,其他试剂可室温保存,有效期12个月。
福尔马林固定石蜡包埋( Formalin Fixed andParaffin Embedde, FFPE)成为病理学、法医病理学等进行样本保存的主要手段。对组织样本进行FFPE的保存,有助于研究人员更加深入地了解经多年保存后的病理标本中所包含的遗传机制和病理成因。目前,**约有2-4亿FFPE组织样本,这些组织样本已经是疾病诊断和科学研究宝贵的的生物学资源之一。
FFPE样本DNA提取试剂盒的应用:
福尔马林由于可以与蛋白氨基发生不可逆交联,所以对保持组织细胞结构的完整性、抗原可测定性、组织渗透性方面均优于其他固定液。因此,FFPE技术长期以来在检验、科学研究中得到广泛应用,尤其是细胞形态学研究和病理学研究。随着这几年分子诊断领域的不断发展,FFPE技术也越来越多的被应用在对疾病进行分子诊断。
疾病研究和病理分析中,由于通过手术、穿刺等方式处理的组织样本离开机体后,很快就会发生腐烂及组织,丧失原有正常的结构和功能。因此,离体的组织要经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤以避免细胞组织,进而进行形态结构分析及*或分子分析等。比如应用FFPE样本DNA提取试剂盒处理组织结构。
FFPE样本的特点:FFPE样本,即用福尔马林固定、石蜡包埋的组织样本。因其能更好地维持组织细胞的结构,便于研究及更好地保存样本,该方法已经被普遍应用。组织样本在前处理中的不规范操作,可能会导致不同程度的DNA损伤,影响NGS检测。
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